免疫組化（IHC）SP法，原來如此簡單！

免疫組化，是應用免疫學基本原理-抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。一、SP法步驟1.SP三步法脫蠟→梯度水化→滅活內(nèi)源性過氧化物酶→抗原修復→封閉→一抗孵育→二抗孵育→SP反應→DAB顯色→蘇木素復染→常規(guī)脫水→透明→封片2、免疫組化的關鍵環(huán)節(jié)①脫蠟和水化②抗原修復③滅活內(nèi)源性過氧化物酶和...

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WB-考馬斯亮藍染色法

一、考馬斯亮藍結(jié)構(gòu)考馬斯亮藍R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學形式，結(jié)構(gòu)上R-250比G-250少了2個甲基。二、蛋白質(zhì)染料要求用染料和生物大分子結(jié)合形成有色的復合物是電泳后檢測常用的方法。選用染料通常應考慮以下要求：1.必須與大分子結(jié)合以形成一個不溶性的，有色的，緊密的復合物，但不結(jié)合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會影響蛋白帶的辨別和定量掃描。2.染料必須容易溶解在對大分子沒有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。3.選用高吸光系數(shù)的...

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細胞凍存的小Tips

細胞凍存是細胞培養(yǎng)中的關鍵環(huán)節(jié)，直接影響細胞存活率和活力，關系到后續(xù)細胞實驗能否按照計劃有效地進行。掌握好細胞凍存的小Tips，有助您做好細胞培養(yǎng)式樣，讓我們一起來看看吧！一、細胞凍存的基本原則細胞凍存遵循“慢凍”原則：讓細胞在超低溫環(huán)境中緩慢進入“冬眠”狀態(tài)，暫時停止其代謝活動。目的是保存細胞樣本，方便復蘇。二、細胞凍存的注意事項1.溫度控制不穩(wěn)定可能導致細胞存活率降低二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護劑，保護細胞。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍...

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Elisa試劑盒怎么選？

在選擇ELISA試劑盒時，不同的用戶往往有不同的選擇標準，無論是靈敏度、樣本類型還是簡便性，核心標準是ELISA試劑盒的重現(xiàn)性。一、試劑盒的應用種屬、檢測樣本的種類一般來說，生產(chǎn)廠家都會在產(chǎn)品名稱上標明種屬，ELISA試劑盒種屬:人、小鼠、大鼠、兔、猴等。待檢樣本種類：體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿等。二、試劑盒的檢測范圍就是標準曲線范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標準曲線范圍內(nèi)，對于高濃度樣本，需要先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。三...

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小鼠給藥操作

一、實驗小鼠的選擇挑選實驗小鼠一般都是根據(jù)實驗要求來篩選品系、品種，在小鼠年齡、體重、生理健康等方面要格外注意。基本上只要滿足以下注意事項，就能挑選到合適滿意的小鼠。1、首先要考慮小鼠是否符合國家標準。2、按照實驗目的和要求來選擇。3、不同季節(jié)和晝夜不同時間，動物機體反應性有一定改變4、不同種、同種而不同品系的小鼠對同一實驗處理反應有很大差別。5、年齡應盡可能一致，體重應大致相近，一般不應相差10%。6、小鼠性別，在實驗研究中，如無特殊要求，一般宜雌雄各半，以避免由于性別差異...

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