如何區(qū)分各種PCR技術(shù)？
PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction）的簡(jiǎn)稱(chēng)，是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，PCR技術(shù)有很多，那么我們?cè)撊绾螀^(qū)分各種PCR技術(shù)呢？讓我們一起來(lái)看看吧！
一、普通PCR
普通PCR即一代PCR，使用普通PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增靶基因，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。
二、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）
實(shí)時(shí)熒光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光染料或者熒光基團(tuán)，在整個(gè)PCR過(guò)程中通過(guò)收集熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)每一個(gè)循環(huán)中擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線和CT值對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量分析。qPCR常用的有兩種方法：SYBR Green法和TaqMan探針?lè)ā?/div>
三、數(shù)字PCR
數(shù)字PCR即三代PCR，是對(duì)原始PCR的另一種改進(jìn)，是一種能夠?qū)崿F(xiàn)核酸絕對(duì)定量的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)，基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨(dú)立、平行的微反應(yīng)單元（納升級(jí)）中，使每個(gè)反應(yīng)室中平均只有一個(gè)拷貝或者沒(méi)有目標(biāo)DNA分子，然后加入熒光信號(hào)進(jìn)行擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)核酸分子的絕對(duì)計(jì)數(shù)，提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度。
四、逆轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse T ranscription-PCR,RT-PCR）
逆轉(zhuǎn)錄PCR也叫反轉(zhuǎn)錄PCR，將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增相結(jié)合，是PCR的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶將一條單鏈RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物。無(wú)論使用何種RNA，關(guān)鍵是確保RNA中無(wú)RNA酶和基因組DNA的污染。RT-PCR技術(shù)靈敏且應(yīng)用廣泛，可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平，細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。一般通過(guò)一步法或兩步法進(jìn)行，一步法是RT反應(yīng)和PCR反應(yīng)在同一試管中進(jìn)行；而在兩步法中兩個(gè)反應(yīng)是分開(kāi)依次進(jìn)行的。
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更新時(shí)間：2024-01-19
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