Serochem PEI轉(zhuǎn)染試劑在CHO懸浮細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染步驟

Serochem PEI轉(zhuǎn)染試劑在CHO懸浮細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染步驟如下：

一、轉(zhuǎn)染前

傳代和擴(kuò)增細(xì)胞以獲得具有大于95%的活力和介于（1.5至2.0）x 10⁶之間的活細(xì)胞密度的培養(yǎng)物.

二、轉(zhuǎn)染

1.在轉(zhuǎn)染前，確保生存能力大于95%，活細(xì)胞密度為（1.5至2.0）x 10 6細(xì)胞/mL。

2.將活細(xì)胞密度稀釋至1.05 x 10 6每毫升細(xì)胞數(shù)。

3.轉(zhuǎn)化pDNA和PEI引物™ 1 mg/mL試劑容器多次以充分混合。

4.將每mL培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移1μg pDNA至一個(gè)干凈的小瓶中轉(zhuǎn)染。用新鮮培養(yǎng)基（5%最終培養(yǎng)體積）稀釋至20μg/mL。

5.將5μL PEI Prime轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的小瓶中™ 每毫升1毫克/毫待轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)物。使用培養(yǎng)基稀釋至75μg/mL（5%最終培養(yǎng)物

體積）。

6.將稀釋的pDNA和PEI Prime™混合在一起. 反轉(zhuǎn)幾次，然后允許在室溫下加蓋休息10分鐘。輕輕翻轉(zhuǎn)，使用前立即關(guān)閉容器

一次。

7.使用10mL pDNA/PEI混合物用于每90mL待培養(yǎng)的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染。一邊攪拌一邊逐漸將混合物加入培養(yǎng)基中。

8.按照典型條件培養(yǎng)細(xì)胞。

三、轉(zhuǎn)染后

如果使用飼料、加強(qiáng)劑、補(bǔ)充劑或增強(qiáng)劑，在轉(zhuǎn)染后6小時(shí)可以添加。

根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)基的不同，可能需要添加鈉丁酸鹽添加到培養(yǎng)基中以獲得CHO懸浮液中的基因表達(dá)。如有必要，確定，制備5個(gè)

轉(zhuǎn)染后的亞培養(yǎng)物，并添加丁酸鈉至0、2.5、5、7.5或10mM的最終濃度基于最終產(chǎn)率的適當(dāng)濃度。如果使用GFP對(duì)照，轉(zhuǎn)染效率應(yīng)超過(guò)70%。48小時(shí)后觀察。對(duì)于優(yōu)化的程序，超過(guò)80%的效率是合理的。監(jiān)測(cè)表達(dá)水平并在觀

察到穩(wěn)定滴度后收獲。對(duì)于典型的過(guò)程，在轉(zhuǎn)染后5至7天分泌的蛋白質(zhì)將最高。其他工藝，如使用低溫和/或使用批進(jìn)料以獲得

最大產(chǎn)量，將改變峰值收獲窗口。

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