關(guān)于血清的這些知識(shí)，你了解嗎？

• 什么是血清

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。

• 血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用

血清的成分多樣，可以給細(xì)胞提供：

1. 基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、維生素、脂類物質(zhì)、無機(jī)物、核酸衍生物等細(xì)胞生長(zhǎng)必需的物質(zhì)；

2. 激素：胰島素、促生長(zhǎng)激素、類固醇激素如睪酮和孕酮、腎上腺皮質(zhì)激素如地塞米松等。

3. 生長(zhǎng)因子：表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等；

4. 結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起著重要作用，它能攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合鐵離子，白蛋白攜帶維生素、激素等；

5. 促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷；

6. 蛋白酶抑制劑：中和某些細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞等)釋放的蛋白酶，從而對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用；

7.血清含有的一些微量元素和離子在代謝解毒中起重要作用，如SeO₃，硒等；

8.血清蛋白使血清具有一定的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，如懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)保護(hù)細(xì)胞。

• 常用的血清

目前常用的血清有胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。

以上三種血清中胎牛血清的品質(zhì)ZUI高，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少，因此價(jià)格也最高。

• 血清的使用與選擇

血清的使用濃度一般在5%~20%，常用是10%。

有些細(xì)胞需要胎牛血清才能生長(zhǎng)，而有些細(xì)胞有小牛血清就能生長(zhǎng)。因此，要根據(jù)具體用途與需要選擇合適的血清。

• 血清的儲(chǔ)存與解凍

1.儲(chǔ)存：建議將血清儲(chǔ)存在-5℃~-20℃（HyClone胎牛血清建議儲(chǔ)存在-10℃）。注意：建議不要將血清儲(chǔ)存在-80℃中！（因?yàn)閮?chǔ)存在-80℃，解凍時(shí)巨大的溫差會(huì)使血清產(chǎn)生更多的沉淀。）

2.解凍：不建議于4℃過夜解凍，也不建議直接將冷凍的血清放在37℃水浴或者溫箱中解凍，因?yàn)槿粞鍥]有混勻，底部的蛋白會(huì)變性形成沉淀。

血清解凍的方法（三步法）如下：

注：在水浴過程中，血清要*浸入水中，同時(shí)在融化過程中要慢慢搖動(dòng)瓶身混勻血清，但在搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫。

血清在解凍后，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求分裝成單次用量，密封好后立即放回-20℃冰箱繼續(xù)儲(chǔ)存以供進(jìn)一步使用，這樣可以有效避免反復(fù)凍融的問題。

• 血清出現(xiàn)沉淀或絮狀物質(zhì)的原因

1. 2-8℃長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。

2. 解凍過程中未混勻。

3. γ-輻照：不會(huì)損害血清的理化特性或細(xì)胞培養(yǎng)性能。

4. 反復(fù)凍融：使血清脂蛋白發(fā)生變性造成渾濁。

5. 血清中殘留的纖維蛋白原：殘留的纖維蛋白原在解凍后會(huì)轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，過量的纖維蛋白在血清中表現(xiàn)為可見的絮狀物質(zhì)。

去除方法：400 g離心。不建議直接過濾血清以去除絮狀物質(zhì)，因?yàn)檫^濾器可能會(huì)堵塞或者截留重要的蛋白質(zhì)。

6. 磷酸鈣：磷酸鈣在血清中通常呈云狀，并且在倒置顯微鏡下觀察會(huì)看到可以自由移動(dòng)的小黑點(diǎn)，因此磷酸鈣沉淀通常被誤認(rèn)為是微生物污染物。

檢測(cè)是否污染方法：將1 mL待測(cè)血清直接倒在細(xì)菌瓊脂平板上，在37℃培養(yǎng)之后觀察菌落的生長(zhǎng)情況。在油鏡（放大1000倍）下觀察革蘭氏染色，以確定是否受到污染。不建議用37℃孵育的血清直接檢測(cè)無菌性，因?yàn)樵?7℃孵育之后，血清中的磷酸鈣沉淀物會(huì)增加。

• 國(guó)內(nèi)購(gòu)買胎牛血清的現(xiàn)狀

難辨真假，產(chǎn)地不實(shí)，有的甚至都不是牛血清。非正規(guī)胎牛血清產(chǎn)品會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和穩(wěn)定以及數(shù)據(jù)的真實(shí)性，對(duì)實(shí)驗(yàn)造成很大的影響。因此，購(gòu)買血清產(chǎn)品時(shí)一定要選擇可靠的產(chǎn)品！

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